Izolacja całkowitego RNA to jedno z podstawowych zadań w biologii molekularnej. Dzięki temu procesowi naukowcy są w stanie badać ekspresję genów, analizować procesy komórkowe, a także tworzyć bardzo cenne narzędzia diagnostyczne. Wysoka jakość i czystość izolowanego RNA są niezbędne dla dalszych analiz. Dzięki niemu odwrotna transkrypcja, PCR czy sekwencjonowanie powinny odbyć się bez zarzutu. Aby osiągnąć najlepsze rezultaty, proces ten wymaga precyzyjnego postępowania oraz stosowania odpowiednich materiałów i procedur.
Zestaw do izolacji całkowitego RNA – co musi zawierać?
Zestawy do izolacji całkowitego RNA są bardzo ważnym narzędziem w laboratoriach biologii molekularnej, umożliwiającym efektywne i bardzo szybkie pozyskanie wysokiej jakości materiału genetycznego. Głównym zadaniem takiego zestawu jest oddzielenie RNA od reszty komponentów komórki, czyli DNA, białek czy lipidów, które mogłyby zakłócić późniejsze analizy. Aby proces izolacji był w pełni skuteczny, zestaw musi zawierać odpowiednie odczynniki i materiały, które zapewnią prawidłowe przeprowadzenie każdego etapu. Kluczowym elementem zestawu są oczywiście odczynniki do lizy komórkowej, umożliwiające rozbicie komórek i uwolnienie ich zawartości. Odczynniki te powinny być dostosowane do rodzaju izolowanych próbek – inne będą odpowiednie dla tkanek zwierzęcych, a inne dla roślinnych. Ważnym składnikiem zestawu są też bufory, które zapewniają odpowiednie warunki środowiskowe podczas izolacji. Nie można zapomnieć, że ważnym elementem zestawu są też odczynniki organiczne, które pomagają w oddzieleniu RNA od DNA i białek, umożliwiając jego oczyszczenie. W tej roli nierzadko wykorzystywany jest chociażby fenol czy chloroform. Jeżeli chcesz nabyć solidne zestawy do izolacji całkowitego RNA, to sprawdź ofertę tej firmy: https://abo.com.pl/oczyszczanie-kwasow-nukleinowych/rna-calkowite.
Izolacja całkowitego RNA – od czego zacząć?
Proces izolacji całkowitego RNA składa się z kilku etapów, które powinny być przeprowadzone precyzyjnie, aby uzyskać materiał genetyczny o należytej czystości i integralności. Kluczowym krokiem jest oczywiście rozbicie komórek i uwolnienie RNA z ich wnętrza. Liza komórkowa realizowana jest przy użyciu specjalnych odczynników, które rozpuszczają błony komórkowe, a także uwalniają całą zawartość cytoplazmy. Na tym etapie kluczowe jest, aby zagwarantować warunki, które zapobiegają degradacji RNA, albowiem cząsteczki RNA są szczególnie wrażliwe na działanie RNAz, czyli enzymów obecnych niemal wszędzie, które w mgnieniu oka mogą je zniszczyć.
O czym pamiętać, wykonując izolację całkowitego RNA?
Po rozbiciu komórek następuje etap oczyszczania RNA, w którym trzeba oddzielić je od DNA i białek. W większości przypadków stosowaną metodą jest ekstrakcja za pomocą fenolu i chloroformu, która gwarantuje błyskawiczne rozdzielenie warstw w próbce. RNA, które jest znane jako bardziej hydrofilne, znajduje się w fazie wodnej, zaś DNA i białka są przenoszone do fazy organicznej. W dalszej kolejności warstwa wodna zawierająca RNA jest oddzielana i poddawana kolejnym etapom oczyszczania. Następnym krokiem w procesie izolacji RNA jest usunięcie zanieczyszczeń i koncentracja RNA. Oczyszczone RNA jest przemywane specjalnymi buforami, które pomagają usunąć resztki soli, fenolu czy pozostałych odczynników, które mogłyby zniekształcić późniejsze analizy. Istotne jest również, aby w czasie tych kroków stosować jednorazowe rękawiczki oraz sterylne narzędzia. W przeciwnym razie izolacja może nie dać zamierzonych skutków.
Artykuł sponsorowany
